产品货号：
BM0341
中文名称：
肽N-糖苷酶F(His标签)
英文名称：
PNGase F(with His-tag)
产品规格：
15kU|75kU
发货周期：
1～3天
产品价格：
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PNGase F来源于Elizabethkingia miricola，是一种高效的酰胺水解酶，可以裂解由天冬酰胺接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。
本制品通过大肠杆菌重组表达，带有His标签，含有50%甘油，常应用于抗体及其相关蛋白去糖基化。
1个酶活力单位(U)指在10μL反应体系中，37℃下反应1h从10μg变性RNase B中除去超过95%碳水化合物所需要的酶量。
| 组分 | 15kU | 75kU |
| PNGase F(500U/μL) | 30μL | 150μL |
| 10×Denaturing Buffer | 150μL | 750μL |
| 10×PNGase F Buffer | 200μL | 1mL |
| 10% NP-40 | 200μL | 1mL |
保存：-20℃
- 蛋白纯度检测：使用SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。
- 糖苷酶与蛋白酶活性检测：无可检出的内切糖苷酶F1、F2或F3活性；无可检出的蛋白酶活性。
75℃温育10min。
使用方法
- 变性条件下去糖基化
- 将1～20μg糖蛋白，1μL 10×Denaturing Buffer和ddH2O（如有必要）混合至总体积10μL；
- 10×Denaturing Buffer在低温储存时可能出现白色沉淀，使用前可先在37℃下温育使其溶解。
- 100℃反应10min使糖蛋白变性后，冰上冷却，离心10 s；
- 加入2μL 10×PNGase F Buffer，2μL 10% NP-40，补充ddH2O使总反应体积为20μL；
- 加入1～2μL PNGase F，轻轻混匀，37℃孵育1~3h。
- 将1～20μg糖蛋白，1μL 10×Denaturing Buffer和ddH2O（如有必要）混合至总体积10μL；
- 非变性条件下去糖基化
- 将1～20μg糖蛋白，2μL 10×PNGase F Buffer和ddH2O（如有必要）混合至总体积20μL；
- 加入2～5μL PNGase F，轻轻混匀；
- 37℃孵育4~24h。
- 将1～20μg糖蛋白，2μL 10×PNGase F Buffer和ddH2O（如有必要）混合至总体积20μL；
- PNGase F的去除
本制品带有His标签，反应后可选择与目标糖蛋白不同的标签，通过亲和层析将PNGase F去除。
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